Méthode Application Avantage Inconvénient Observation Image

Cryostat(s)

(7µm à 40µm)
Coupes de tissus fixés ou non fixés

Congélation à l’azote liquide

 Immunomarquages en fluorescence ou enzymatique
Hybridation in situ
Coloration		 Technique rapide, de choix pour la mise en évidence d’antigène « difficiles », antigènes liposolubles…

Possibilité de travailler sur tissus fixés ou non fixés

Pas de dégradation des sites antigéniques : Protéine (enzyme, récepteur, mARN …) substance chimique (neurotransmetteur…)

Ø Pas d’inclusion
Ø Pas de déshydratation
Ø Pas de polymérisation
Ø Pas de chaleur
Ø Pas de réactions chimiques

 Technique difficile à maîtriser, coupes souvent irrégulières

Préservation morphologique variable selon les tissus, présence de cristaux de glace (trous)

 Microscopie photonique

Microscopie à fluorescence (ApoTome)

 Coupe d’organe de Corti de rat

Microtome(s)

(4µm à 20µm)
Coupes de tissus fixés

Imprégnation en paraffine

 -Coloration histologique
Etude anatomo-pathologique-Etude qualitative et quantitative-Coupes sériées: analyse d’image et comptage.
Immunohistochimie		 Morphologie++

Technique de choix pour toutes les colorations histologiques

 Immunohistochimie :

1- Antigènes sensibles à la chaleur
2- A la déshydratation
3- Aux réactions chimiques (précipitation lipidique…)
4- A l’inclusion et la polymérisation en paraffine (démasquage indispensable)
Inclusion lourde, automate à inclusion indispensable
Immunofluorescence non adaptée (bruit de fond)

 Microscopie photonique
Scanner de lames – Nanozoomer		 Coupe de genou de souris

Ultramicrotome(s)

(0,25µm à 2µm)
Coupes de tissus fixés

Imprégnation en résine epoxy (50nm à 100nm)

 Microscopie photonique coupe fine de 1µm :
1- Contraste des structures au bleu de toluidine
2- Etude qualitative et quantitative, coupes sériées : analyse d’images et comptageMicroscopie électronique à transmission (MET) :
1- Immunomarquages des structures fines en MET : « Pre-embedding et Post-embedding »		 Seule technique histologique permettant d’observer au niveau ultrastructural

Morphologie +++

Pour l’immunomarquage : nécessité d’une mise au point en fonction des tissus

 Technique longue a mettre en œuvre

Paramètres de préparation à respecter strictement

Nécessite un technicien(ne) expérimenté(e)

 Microscopie photonique
METScanner de lames-Nanozoomer		 Immunocytochimie ultrastructurale en pré-embedding (réalisé avant enrobage en résine Epoxy)

Vibratome(s)

(50µm à 500µm)
Coupes épaisses de tissus fixés ou vivants

Possible imprégnation en gélose pour des petites pièces

 Immunomarquages en fluorescence

Hybridation in situ

Electrophysiologie (patch-clamp…)

Culture : explants

Préparation de coupes pour l’inclusion en MET

 Coupes très épaisses (50µm à 500µm)

Coupes sur tissus vivants (cuve refroidissante à 4°C) ou sur tissus fixés

Très bonne morphologie

Immunofluorescence ++

Reconstitution en 3D

 Technique de coupe difficile à maitriser: Mise au point selon les tissus

Difficultés de coupes pour les spécimens de dureté hétérogène

Problèmes de pénétration des anticorps sur coupes épaisses

Démasquages des sites antigéniques

 Microscopie Confocal en 3D

Microscopie bi-photonique

 Coupe de crête vestibulaire de rat (photo de Aurore Brugeaud)