Le contexte :

Grâce au Programme Opérationnel FEDER-FSE 2014-2020 Languedoc Roussillon et à un co-financement d'IBiSA, le RHEM a acquis en mars 2018 un automate d’immunomarquage et d’hybridation in situ : le Discovery Ultra de Ventana Roche.

 

L'équipement :

Ce nouvel automate permet de réaliser des marquages immunohistochimiques (IHC) et immunofluorescents (IF) en simple ou multimarquages. Les avantages de cet automate sont :

  • 30 tiroirs indépendants les uns des autres. Ainsi, on peut faire, lors d’un même cycle, autant de protocoles différents que de lames, soit au maximum 30 protocoles différents sur 1 lame chacun.
  • Une répartition homogène des réactifs sur la lame assurant une meilleure homogénéité de marquage, grâce à des flux d’air pulsés régulièrement.
  • La possibilité d'avoir sur une lame plusieurs coupes de tissus pouvant appartenir à différents blocs.
  • La possibilité de faire des dépôts des anticorps et des sondes de façon automatisée mais aussi en manuel, ce qui permet de limiter les volumes-morts de réactifs lors des mises au point.
  • Le dépôt d’un faible volume d’anticorps et de sondes (100 µL/lame), limitant le coût de la réaction.
  • Le contrôle de la température d’incubation des anticorps à 37°C.
  • Une « ouverture » complète de l’automate, ce qui permet d’utiliser des kits de toutes marques.
  • Une traçabilité assurant l’enregistrement de toutes les conditions réalisées sur vos lames.

Avec cet équipement, nous disposons des derniers développements technologiques en IHC et IHC en fluorescence, ce qui permet de réaliser des multimarquages en visible et en fluorescence même avec des anticorps primaires issus d’une même espèce.

 

Les Applications :

Les services proposés avec cet automate sont les suivants :

1) la réalisation de marquages déjà validés sur l’automate :

  • marqueurs de cellules inflammatoires : CD3e, PAX5, CD45, F4/80
  • marqueurs de cellules en prolifération ou apoptose : Ki67 (humain ou murin), Casp3 activée, phospp-H3
  • marqueurs de vaisseaux sanguins et lymphatiques : CD31, LYVE-1,
  • marqueurs de cassures de l’ADN : phospho-gH2AX,
  • tag ou gènes rapporteurs : GFP,
  • suppresseurs de tumeurs : P53,
  • marqueurs de cellules humaines : sonde ALU, surface of intact mitochondria,
  • marqueurs de voie de signalisation : HES1
  • marqueurs de types cellulaires : vimentine, Pan-CK, alpha-SMA

2) la mise au point de l'automatisation de nouveaux immunomarquages en simplex ou multiplex, à la demande d'un chercheur ou du comité de pilotage du plateau.

Pour limiter les coûts, il peut être envisager de placer 2 coupes issus de 2 blocs différents sur la même lame. Pour cela, n'hésitez pas à nous consulter.

Si d'autres marqueurs vous intéressent, n'hésitez pas à nous soumettre vos idées de développements.

Les nouveaux immunomarquages proposés seront diffusés sur le site de RHEM ou à travers la lettre d'information de Biocampus.

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